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猪圆环病毒病研究进展
作者:张丹俊,胡晓苗,赵瑞宏等    编辑:editor2   来源:中国执业兽医网    更新时间:2008-10-10
    猪圆环病毒(PCV)病是近几年新发现的一种猪的传染病,由猪圆环病毒(PCV)引起猪的一种多系统功能障碍性疾病。猪圆环病毒病临床上以断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)等为主要特征,该病原体已被确认为猪圆环病毒Ⅱ型 (PCV-2)。研究表明,猪圆环病毒Ⅱ型(PCV-2)不仅是断奶仔猪多系统衰竭综合症(PMWS)的病原而且能够引起多种猪病,主要有新生仔猪先天性脑震颤、猪皮炎及肾衰综合征、猪增生性坏死性肺炎等,并常与猪细小病毒(PPV)、猪繁殖与呼吸综合症病毒(PRRSV)等病原合并感染使病情加重和复杂化;也是引起母猪繁殖障碍的病原之一。
    一、病原特性
    PCV属于圆环病毒科圆环病毒属。该科是国际病毒分类委员会(ICTV)第六次学术报告新增的病毒科。PCV是兽医学上已知动物病毒中最小的病毒,无囊膜,呈正十二面体结构,病毒基因是一条共价结合形成闭环的DNA单链,病毒衣壳蛋白为一条多肽链。PCV分为PCV-1和PCV-2两个型。PCV-1无致病性,包括PCV-PK15及其它流行于猪群但无致病性的分离株;PCV-2有致病性,对外界环境抵抗力较强,在酸性环境及氯仿中可存活较长时间,对高温(56℃和70℃)有抵抗作用,无血凝性,在原代胎猪肾细胞上不能生长,可在PK-15细胞中生长,但不引起细胞病变,其核酸的序列极度保守不易发生变异。
    二、流行病学
    (一)传播范围  从1991年首次在加拿大暴发PCV-2后,该病毒在全世界范围内迅速传播,世界上其它主要养猪国家都陆续报道了PCV-2的发生。在我国,2000年郎洪武等首先检测到了PCV-2的流行,在北京、河北、山东、天津、江西、吉林、河南等省市的猪群中检测到了PCV-2抗体,阳性率高达51%,随后在我国其他养猪的省份陆续见有发生该病的报道。
    (二)传播特点  PCV-2的易感动物是猪,既可水平传播也可垂直传播,而人工授精和自然交配则可能是PCV-2在繁殖群中的主要传播途径。猪群感染率高、混合感染与隐性感染是PCV-2病毒流行的主要特点。尽管PCV-2感染率很高,但感染后不显示临床症状的猪比率也较高,存在隐性感染的现象。Sanchez等用PCV-2接种26头猪后,在其中6头组织中检测到了很高的病毒含量(10(4.5-4.7)TCID50/g),但是这些猪都未表现出临床症状,而组织病理学检测结果显示,PCV-2的感染造成了组织病理损伤,尤其是侵害免疫系统,造成淋巴细胞减少和单核细胞浸润。这种隐性感染的现象对养猪业的威胁也是巨大的,PCV-2广泛存在于猪群中,因隐性感染而不易被察觉,但实际上已对猪的免疫系统造成损害,造成猪群的群体免疫力下降,一旦接触其他病毒和细菌就会造成群体的疾病大暴发。Rosell等从慢性经过死亡的2个病例的病理变化发现,PCV从猪的鼻、口腔侵入体内,在扁桃体局部淋巴结增殖后,向其它淋巴组织肺、肝、肾传播,受慢性感染的影响,诱发免疫抑制、肠炎、间质性肾炎及肝损伤。Segales等利用流式细胞计数器分析感染猪外周血液中白细胞变化,发现单核细胞增加,T淋巴细胞(主要是CD4+)和B淋巴细胞减少,不成熟粒细胞的密度偏低。表明PCV引起了淋巴细胞凋亡,APC(抗原递呈细胞)递呈抗原能力的减弱,同时降低了B淋巴细胞和CD4+T细胞的机能。因此使患猪处于免疫抑制状态,导致患猪抵抗力下降。
    三、猪圆环病毒病的临床症状、剖检变化
    目前的研究认为PCV-2主要引起猪的以下几种疾病:断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)、猪皮炎与肾衰综合征(PDNS) 以及新生仔猪先天性震颤(CT)等。
    (一)断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)  PMWS是一种多因子所致的疾病,但多数学者认为PCV-2是首要病因。PMWS多发生于7~15周龄的后期哺乳猪和早期育肥猪,主要表现为精神不振、食欲不佳、体温升高至41℃~42℃、生长迟缓、消瘦、贫血、皮毛粗乱、皮肤苍白、常伴有黄疸,伴有黄疸的猪可见全身组织黄染;有的在耳部、腹部可见出血性紫红色斑块,站立不稳、呼吸困难、咳嗽、水样下痢或黑便;部分仔猪出现神经症状,震颤,四肢呈划水状。剖检变化最典型的症状为淋巴结和肺的病变,包括全身淋巴结肿大,特别是腹股沟浅淋巴结、肠系膜淋巴结最为明显,有时可达正常组织的8倍;肺脏肿大,呈间质性肺炎,肺坚硬或似橡皮,肺泡出血者颜色加深,尖叶、心叶萎缩或实变。
    (二)猪皮炎及肾衰综合征(PDNS)   多发生在保育猪及育肥猪。该病最显著的特点是皮肤病变,常被误认为是蚊、蝇、螨虫叮咬皮肤所致。可见耳、背部、胸部、腹部、前肢、后腿突然出现广泛的各种大小不一的红斑、隆起的小丘疹或深褐色坏死灶。患猪呆滞,可能发烧,不愿进食,呼吸困难、体重迅速减轻或生长停滞。四肢和眼睑周围可见水肿,浅层淋巴结肿大,关节有时也见肿胀。耐过的猪长期生长不良,形成僵猪。该病发病率10%~60%不等,死亡或淘汰猪占发病猪一半以上。剖检主要是肾脏肿大,颜色变淡、变白,有时肾表面还会有细小的出血斑点,淋巴结肿大、出血,腹水增多,肺脏一般有炎症变化。大多数病猪消瘦、衰竭死亡。其他病原如PRRSV或败血性巴氏杆菌与PCV-2的混合感染,可能是造成PDNS发病的重要原因。
    (三)新生仔猪先天性震颤(CT)  先天性震颤主要发生于刚出生不久的仔猪,表现为生后不久或出生后仅几个小时,即发生震颤,有的全窝猪发生,有的部分发生,临床上症状轻重不一,有的仔猪是全身一致的、有节奏的震颤,无法站立,被迫躺卧,躺地后,震颤减轻或停止,再站立又出现症状;有的仔猪全身震颤程度不同,或头部、颈部强烈震颤,或后躯震颤不能站立,显著成跳跃状,病情轻的,虽然全身震颤,但仍可运动,体温、脉博、呼吸均无明显变化,本病只从母猪垂直传给仔猪,仔猪之间不存在水平传播,症状轻微的病例经数小时或数日自愈,重病病例病程可持续数周,若4~5日不死,并能吃到母乳的仔猪,一般预后良好,也有的病猪因吃不到母乳或受挤压而死。Stevenson用PCV-2原位杂交和间接免疫荧光试验检测患先天性震颤的病猪组织发现,在患先天性震颤猪的小脑、大脑及脊髓部神经元等中枢神经系统的组织中存在大量PCV-2,证明了PCV-2能引起猪先天性震颤。
    四、猪圆环病毒病的诊断
    根据流行病学、临床症状和剖检病变等可对本病做出初步诊断,但要做到确诊还需要借助于实验室的诊断技术和方法。
    (一)针对病毒抗原的诊断技术
    1.PCR技术 从PCV-2的DNA链上设计一对特异性引物进行PCR反应,可直接检测组织病料及细胞培养物中的病毒核酸,是一种快速、简便、特异的诊断方法,现在已经发展出多种改进的PCR方法。
    多重PCR可以简单、方便地同时检测2种或2种以上的病毒DNA,现已广泛应用于疾病的快速诊断等方面。2003年Kim J等建立了从精液中同时检测PCV和PPV的多重巢式PCR方法。他们对98份样品进行了检测,结果20份(20.4%)为PCV阳性,42份(42.9%)为PPV阳性。该结果表明:多重巢式PCR方法比传统的病毒分离方法更敏感、快速。Yu等建立了一种反转录PCR(RT-PCR)方法来检测复制型病毒。作者设计了2对引物,1对引物是扩增 PCV-2ORF2基因的全长DNA(984bp),另1对是扩增经切割的ORF2衣壳蛋白的mRNA(594bp)。结果从病毒培养物的DNA中只能扩增出984bp片断,不能扩增出594bp片断,而从提取的 PCV-2 RNA中只能扩增出594bp片断,并且最早可在病毒感染后14 h检测到。
    2.核酸杂交技术 Rosell C等用杂交技术从30头患猪中检测到了28份阳性,并发现病毒的DNA主要位于淋巴器官,尤其存在于淋巴结部位。也在同一年里, Sirinarumitr T等利用荧光标记RNA的探针与细胞中的病毒核酸或与福尔马林固定的、石蜡包埋的组织中的PCV病毒核酸进行杂交,建立了快速检测PCV的原位杂交技术,他们在该方法中,应用了快速加强杂交缓冲液进行杂交,结果仅需7~8 h,这比传统的杂交方法大大缩短了检测时间,因而它更适用于对常规PCV的诊断。
    (二)针对病毒抗体的诊断技术
    1.间接免疫荧光(IFA) 间接免疫荧光技术常用于猪圆环病毒感染的血清学普查,其特点是快速、特异、敏感,是目前诊断PCV-2常用的血清学方法。在用于抗体检测时,可将PCV-2接种于96孔细胞培养板的PK-15细胞上,培养一定时间后,经丙酮固定,干燥后即可。2004年,Racine S等将PCV-2 IAF-2897株的ORF2克隆入真核表达载体pCEP5中,并获得了大量的表达,他们用IFA技术对PMWS猪场的44份血清样品进行了检测,结果15份为PCV-2阳性,检出率为57.1%。IFA方法不仅可以用于检测抗体,而且可以用已知PCV特异性抗体检测抗原,主要用于PCV的分离鉴定及猪源细胞PCV污染情况的普查,为疾病诊断和净化猪源细胞提供了有效手段。
    2.酶联免疫吸附试验(ELISA)
ELISA方法具有灵敏、快速的特点。Blanchard等用在昆虫细胞中表达的GST-ORF-2融合蛋白为抗原建立了一种ELISA检测方法,结果表明ELISA方法灵敏、特异性好,能区分PCV-1和PCV-2。说明应用表达蛋白为抗原建立ELISA方法,其抗原制备较简单,产量高,灵敏性和特异性都很好,因此更适用于临床检测及大规模血清学调查。国内崔尚金等采用PCV抗原和正常细胞对照抗原,建立了间接ELISA,并被农业部推荐为进行流行病学调查的方法。
    五、猪圆环病毒的防制
    由于至今对PCV-2引起的相关疾病的病原和致病机制尚未完全了解,因此,还不能完全依赖特异性防制措施,只有同时结合良好的饲养管理,采取综合性的防制措施,才能更好的控制疾病的发生。
    1.目前还没有有效的疫苗可以用来预防PCV的感染。虽然国内外已研制出基因工程苗、亚单位疫苗,但因PMWS并非仅由PCV引起, PCV-2的共同感染源很多,不同猪场的疾病谱往往不同,发病猪场首先要确定自身的共同感染源,并应用相应的疫苗对母猪实施合适的免疫,对确保妊娠期胎儿和哺乳仔猪的安全相当重要,与此同时,通过病原检测确定母源抗体消失后的仔猪和育成猪的共同感染源,采用合适的疫苗和药物防治,才能收到应有的效果。
    2.良好的饲养管理是预防本病发生的关键。要做到合理的分群与混养,适度降低饲养密度,保持圈舍通风良好,有效杀灭圈舍内蚊蝇,以减少和降低可能诱发疾病发生的一切不良应激因素;饲喂优质全价饲料,严禁用霉变饲料喂猪,以保持猪的良好体质;实行严格的全进全出制度,避免将不同日龄的猪混群饲养,从而减少和降低猪群之间PCV及其它病原的接触感染机会;建立完善的生物安全体系,将消毒卫生工作贯穿于养猪生产的各个环节;避免从疫区引进猪只,严格控制外来人员、车辆、货物等进入猪场。
    3.本病无特效药物可治。对于早期发现的疑似感染猪要进行检查、隔离、淘汰,以控制病情传播。对没症状的同群猪可在饲料中添加抗菌素、中药抗病毒药物及增强机体免疫力的药物,对控制并发或继发感染和病情的发展有一定效果,对病猪必须采取注射给药。
参考文献(略)
 
  • 上一篇文章: 猪喘气病继发副猪嗜血杆菌病的诊治

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